in vivo-jetRNA^®应用于动物模型中，可快速评估SARS-CoV-2疫苗的接种和治疗

动物模型在对研究SARS-CoV-2的适应性免疫反应以及测试新型疫苗和抗病毒策略中意义重大。

Hassert和同事(2020年)的研究重点是开发这样的小鼠模型，他们的小鼠模型表达人ACE2 (hACE2)受体，以确保与SARS-CoV-2刺突蛋白相互作用导致小鼠感染和免疫反应。有几种方法已经被测试来生成表达hACE2受体的小鼠模型，包括CRISPR/Cas9基因组编辑和病毒载体策略(AAV，腺病毒)。他们利用一种新的技术，使小鼠模型的生成更加容易、更快，以推动疫苗和治疗策略的开发，并为其他研究团队提供一个明确的指导。关键在于:一种非病毒直接注射转染试剂，在体内与mRNA结合的 in vivo-jetRNA^®。通过这种实验方法表明，在体内用in vivo-jetRNA^®转染mRNA可诱导：i)细胞表面hACE2受体的表达和  ii) SARS-CoV-2体内感染

FectoPRO^®用于规模化生产抗COVID-19抗体和新策略

 

冠状病毒刺突蛋白是病毒进入细胞的关键，它具有与细胞表面金属蛋白酶ACE2高亲和力结合的能力。研究人员正专注于研究刺突蛋白的三级结构，以开发有效的治疗方法。研究刺突蛋白的第一步是在哺乳动物细胞中生产重组蛋白。FectoPRO^®转染试剂可在悬浮培养的HEK-293和CHO细胞及其衍生系中快速、高产量地生产重组蛋白。HEK-293和CHO细胞系衍生系已经允许在更高密度下生长，FectoPRO^®可以用来转染这些更高细胞密度的细胞系。这种新开发策略作为疫苗的补充治疗或许会有些效力，特别是在现有变体数量不断增加的情况下。在最近的一项研究中，Grishin等人在2021年使用FectoPRO^®转染试剂在高密度Expi293细胞中快速生产Spike蛋白的受体结合区(RBD)和ACE2受体的相应结构区。其研究目的是探究SARS-CoV-2 Spike蛋白RBD中多个二硫键的破坏是否会破坏其功能，从而降低其与ACE2受体的结合亲和力。他们证明二硫键的还原剂如DTT和TCEP具有很强的抗病毒作用，可以防止感染。

 

参考文献：Grishin AM et al. (2021). bioRxiv. Spike protein disulfide disruption as a potential treatment for SARS-CoV-2.

 

随着因刺突蛋白(spike protein)的多次突变，新型冠状病毒(SARS-Cov-2)变种不断增加。人们不禁要问，二次感染的可能性有多大? Kaku和他的同事们在理解这些新的变体如何改变游戏规则方面的方法是，在delta (B.1.617.2)变体产生之前，通过评估对抗α变体(B.1.1.7)的中和抗体对现有变体(B.1.351)和gamma (P.1)的中和程度。为此，在2020年3月从两名感染了阿尔法变异病毒的康复患者身上提取了血浆样本，分离SARS-CoV-2中和抗体和 IgG+记忆B细胞，克隆免疫球蛋白可变基因，获得IgG重链和轻链表达质粒。将重链和轻链表达质粒分别用FectoPRO^®转染试剂和FectoCHO^®表达系统在HEK-293T细胞或ExpiCHO细胞中共转染，来获取过表达的抗体。FectoCHO^®表达系统保证了CHO细胞系的高蛋白的产量(比如CHO-S、CHO-K1和 ExpiCHO-S)。从每个病人身上分离出来的400多个抗体都是瞬时过表达的，其中30-50个抗体是针对S蛋白的，只有1-4个抗体对α变体具有中和活性。大多数抗体对β和γ变异的中和能力显著下降，这表明监测逃逸免疫系统的新变异很重要。

 

参考文献：Kaku Y et al. (2021) Cell Reports. Resistance of SARS-CoV-2 variants to neutralization by antibodies induced in convalescent patients with COVID-19.  

 

另一个难题是开发一种快速、准确且具有低廉成本的血清学检测方法，以促进公共卫生的应对策略。抗体检测对于确定对SARS-CoV-2产生保护性免疫力的个人很重要，同时能够提供有关以往接触病毒或由于接种疫苗运动而获得这种免疫力的持续时间的数据证据。Esmail和同事们在2021年开发了一种同位素的独立测试。与大多数现有的针对抗体(IgG, IgM, IgA)的抗体测试不同，这个测试是基于抗体依赖的凝集试验抗原涂层乳胶颗粒。乳胶颗粒表面包覆SARS-CoV-2抗原、S-RBD或核衣壳，与血浆孵育。当含有中和抗体时，它诱导乳胶粒子的凝集。为了覆盖乳胶颗粒，在高密度Expi293F细胞中使用FectoPRO^®转染试剂在短时间内(一周内)瞬间产生蛋白。

jetOPTIMUS^®：研究冠状病毒必不可少的转染工具

jetOPTIMUS^®是一种更加高效的DNA转染试剂，可显著提高大多数贴壁细胞类型DNA的转染效率，无论是易于转染的HEK-293细胞还是难转染细胞，如原代间充质干细胞等。
贴壁HEK-293细胞是病毒感染研究中常用的细胞模型，在病毒感染过程中，它有助于识别起决定性作用的蛋白质之间的相互作用。例如，Zhang Ke等人在2021年的研究中发现，利用jetOPTIMUS^®作为核酸递送工具研究了SARS-CoV-2的NSP1蛋白与mRNA输出受体NXF1 NXT1之间的胞内蛋白-蛋白相互作用。与流感病毒一样，NSP1蛋白也可能通过靶向mRNA核输出机制来阻断内源性基因的表达，从而有利于其自身的复制。使用jetOPTIMUS^®转染带有编码不同NSP1结构的质粒DNA的HEK-293细胞，从细胞裂解液中进行GST融合蛋白沉降技术和NXF1 NXT1的共免疫沉淀。参考文献：Zhang K. et al. (2021) Sci Adv 7, eabe7386. Nsp1 protein of SARS-CoV-2 disrupts the mRNA export machinery to inhibit host gene expression.